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正相色譜柱與反向色譜柱的區別

更新時間:2023-08-15

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  在正相色譜中,一般采用極性鍵合固定相,硅膠表面鍵合的是極性的有機基團,鍵合相的名稱由鍵合上去的基團而定。常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)鍵合相。流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機溶劑,如烴類溶劑,或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇、乙腈等),以調節流動相的洗脫強度。通常用于分離極性化合物。一般認為正相色譜的分離機制屬于分配色譜。組分的分配比K值,隨其極性的增加而增大,但隨流動相中極性調節劑的極性增大(或濃度增大)而降低。同時,極性鍵合相的極性越大,組分的保留值越大。該法主要用于分離異構體,極性不同的化合物,特別是用來分離不同類型的化合物。
  在反相色譜中,一般采用非極性鍵合固定相,如硅膠-C18H37(簡稱ODS或C18)硅膠-苯基等,用強極性的溶劑為流動相,如甲醇/水,乙腈/水,水和無機鹽的緩沖液等。
  正相色譜和反相色譜的區別:
  本質上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強;反相色譜柱填料極性弱,洗脫順序由強到弱。
  1、正相色譜
  正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
  2、反相色譜
  反相色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。